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  近年來(lái)，免疫治療作為一種新的治療策略得到迅速的發(fā)展。其中部分化療藥物（如紫杉醇、阿霉素或奧沙利鉑）通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫原性死亡（ICD），釋放腫瘤抗原和危險(xiǎn)相關(guān)分子模式激活抗原，產(chǎn)生抗原特異性的免疫反應(yīng)。盡管如此，由于高劑量的化療藥物存在藥物副作用大、治療效果差和易被內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)清除等缺陷，腫瘤免疫微環(huán)境（TME）參與了免疫抑制的不同機(jī)制來(lái)逃避免疫監(jiān)視，單用化療產(chǎn)生的免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)仍難以產(chǎn)生強(qiáng)烈的抗腫瘤免疫反應(yīng)。因此，開發(fā)一種有效協(xié)同調(diào)節(jié)多種免疫細(xì)胞的納米藥物以增強(qiáng)抗癌免疫治療至關(guān)重要。

  以NK細(xì)胞為基礎(chǔ)的免疫療法具有明顯的優(yōu)勢(shì)，如細(xì)胞識(shí)別時(shí)不受抗原特異性控制同時(shí)充當(dāng)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)細(xì)胞，釋放穿孔素和顆粒酶等殺死異常細(xì)胞來(lái)調(diào)節(jié)先天性和獲得性免疫反應(yīng)。此外，米托蒽酮、DOX、順鉑等化療藥物在增強(qiáng)NK細(xì)胞的敏感性和提高其細(xì)胞毒性方面具有一定的潛力。例如，DOX已被證明能夠通過(guò)上調(diào)腫瘤細(xì)胞中的TRAIL受體和下調(diào)細(xì)胞內(nèi)的FLICE抑制蛋白來(lái)增強(qiáng)NK細(xì)胞的靶向性，并促進(jìn)由Caspase-8裂解觸發(fā)的凋亡信號(hào)。

  在眾多的納米載體體系中，含磷樹狀大分子和PAMAM樹狀大分子具有顯著的不同之處，具有分子量均一、較強(qiáng)的剛性結(jié)構(gòu)、自身的藥物活性等特性。例如，含磷樹狀大分子與金屬絡(luò)合物可以用于抗腫瘤治療應(yīng)用，修飾磷酯酸鈉鹽的含磷樹狀大分子可以抑制外周血單核細(xì)胞（PBMC）中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）的擴(kuò)增并調(diào)節(jié)單核細(xì)胞和NK細(xì)胞之間的復(fù)雜信號(hào)誘導(dǎo)NK細(xì)胞增殖用于腫瘤的治療。

  由于含磷樹狀大分子具有的剛性結(jié)構(gòu)使其難以物理封裝化療藥物，兩親性含磷樹冠大分子的發(fā)展解決了這一難題，可通過(guò)在水溶液中自組裝形成膠束用于封裝藥物�？紤]到復(fù)雜的腫瘤微環(huán)境仍然是免疫細(xì)胞發(fā)揮有效抗腫瘤細(xì)胞活性的主要障礙，而針對(duì)PD-1/PD-L1的“免疫檢查點(diǎn)阻斷”（ICB）療法可通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞表面PD-L1的表達(dá)逆轉(zhuǎn)CD8+ T和NK細(xì)胞的衰竭，從而解除免疫抑制，恢復(fù)抗腫瘤免疫。因此，基于磷酯酸鈉鹽含磷樹冠大分子的免疫調(diào)節(jié)活性，并聯(lián)合腫瘤ICD和ICB療法有望重塑腫瘤免疫微環(huán)境并產(chǎn)生抗腫瘤免疫記憶效應(yīng)。 

圖1. M-G1-TBPNa@DOX的合成及應(yīng)用示意圖。

圖2.（A）M-G1-TBPNa和（B）M-G1-TBPNa@DOX的TEM圖；（C）M-G1-TBPN和（D）M-G1-TBPNa@DOX的AFM圖；各材料的水合粒徑（E），電勢(shì)（F）及紫外吸收曲線（G）；（H）M-G1-TBPNa@DOX在水、PBS以及培養(yǎng)基中的粒徑變化曲線。

圖4.（A）B16細(xì)胞與不同材料處理后的PBMCs共孵育的示意圖；不同材料處理下PBMCs中（B-C）NK細(xì)胞的比例分析，（D）IFN-γ的含量，（E）穿孔素的表達(dá)及（F）顆粒酶B的表達(dá)情況分析；B16細(xì)胞與不同材料處理后的PBMCs共孵育后，B16細(xì)胞的（G）細(xì)胞凋亡結(jié)果，（H）相關(guān)凋亡蛋白的Western blot試驗(yàn)結(jié)果圖及（I）caspase-3的表達(dá)情況。對(duì)于（B-I）：Ⅰ，PBS；Ⅱ，IL-2；Ⅲ，IL-2+M-G1-TBPNa；Ⅳ，IL-2+M-G1-TBPNa@DOX。

圖5.（A）小鼠腫瘤部位CRT的分布；（B-C）淋巴結(jié)的樹突細(xì)胞熟化情況結(jié)果分析圖；血清中（D）IL-6、（E）IL-12p70、（F）TNF-α的表達(dá)水平；（G-I）腫瘤部位CD4+和CD8+T細(xì)胞的分布情況；（J）CD8+/CD4+ T細(xì)胞的比例；（K）腫瘤部位Tregs的表達(dá)水平分析；（L）CD8+T細(xì)胞與Tregs的比值。

  隨后，研究團(tuán)隊(duì)進(jìn)一步評(píng)估了M-G1-TBPNa@DOX+aPD-L1的聯(lián)合療法在體內(nèi)產(chǎn)生的長(zhǎng)期免疫記憶效應(yīng)，在聯(lián)合治療的基礎(chǔ)上進(jìn)行了抗腫瘤轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)（圖6A）。研究發(fā)現(xiàn)聯(lián)合治療使小鼠脾臟和淋巴結(jié)中的記憶T細(xì)胞含量顯著增加（圖6B-F），并且抑制了腫瘤的肺轉(zhuǎn)移情況（圖6G-I）。 

圖6.（A）小鼠體內(nèi)抗腫瘤轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)示意圖。（B）脾臟部位、（C）淋巴結(jié)部位的記憶T細(xì)胞比例分析。（D）脾臟部位中央記憶T細(xì)胞和（E）效應(yīng)記憶T細(xì)胞比例分析；（F）IFN-γ的表達(dá)情況；（G-I）各組小鼠經(jīng)治療后抗腫瘤轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

  簡(jiǎn)而言之，該研究設(shè)計(jì)的M-G1-TBPNa@DOX納米藥物具有以下優(yōu)勢(shì)：1）構(gòu)建的納米藥物膠束顯著提高了DOX的生物利用度并降低了其副作用，DOX介導(dǎo)的化療作用促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生ICD，激活免疫系統(tǒng)；2）納米膠束固有的免疫調(diào)節(jié)活性促使PBMCs中的NK細(xì)胞增殖，通過(guò)血液循環(huán)作用被招募到腫瘤部位，協(xié)同其余免疫細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤功能；3）M-G1-TBPNa@DOX與aPD-L1的聯(lián)合治療有效產(chǎn)生長(zhǎng)期免疫應(yīng)答并抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。本研究制備的M-G1-TBPNa@DOX為協(xié)同調(diào)節(jié)多種免疫細(xì)胞以實(shí)現(xiàn)增強(qiáng)的抗腫瘤化學(xué)免疫治療提供了新思路。

  文章鏈接：https://doi.org/10.1002/adma.202208277